在制备壳寡糖的过程中,控制产品的质量和纯度至关重要,以下是我们山东肽合生物科技有限公司总结的一些关键措施:
一、选择合适的制备方法
酶解法:是壳寡糖生物制备的主要方法,具有反应条件温和、降解过程及降解产物相对分子量分布容易控制、制备的低聚壳聚糖生物活性高、产物不用除盐、过程容易控制且不对环境造成污染等优势。酶解法分为专一性酶降解法和非专一性酶降解法,专一性酶如几丁质酶和壳聚糖酶可以高选择性地切断壳聚糖中的β-1,4-糖苷键,从而制得特定的低分子量壳寡糖。
避免化学法:化学法如酸水解法虽然见效快,但反应苛刻、成本高、易造成环境污染,且得到的壳寡糖分子量宽、易得到无生物活性的氨基葡萄糖单元、纯化后处理繁琐。
二、优化制备工艺参数
控制反应条件:在酶解过程中,需要严格控制反应温度、pH值、酶浓度和反应时间等参数,以确保酶解反应的高效进行和产物的稳定性。
选择合适的酸溶体系:国内用酶法生产壳寡糖目前有醋酸、乳酸、柠檬酸三种酸溶体系,不同的酸溶体系对壳寡糖的质量和纯度有一定影响。例如,醋酸分子量小,喷雾过程中会挥发,因此壳寡糖粉成品里面醋酸根的含量最低。
三、加强分离纯化步骤
金属亲和层析、离子交换层析和凝胶层析:是壳寡糖分离纯化的常用方法,可以有效去除杂质、提高产品的纯度和质量。
多次上样富集:通过多次上样进行富集,可以提高壳寡糖的纯度。例如,选用上样量0.10g、洗脱速度0.20mL/min对壳寡糖进行分离,多次上样后收集的组分旋蒸浓缩后冷冻干燥,并进行TLC和HPLC分析。
四、建立严格的质量控制体系
测定关键指标:如壳聚糖的粘度、壳聚糖酶的酶活和酶解反应时间等,以确保分子量达到最佳指标。
检测纯度:通过TLC和HPLC等分析方法,对壳寡糖的纯度进行定量和定性分析。例如,利用归一化法得出壳2糖纯度为95.7%、壳3糖纯度为97.1%、壳4糖纯度为97.7%、壳5糖纯度为89.4%。
监控褐变程度:壳寡糖的褐变程度与温度、湿度、pH、加热时间和还原剂等条件密切相关,褐变会影响壳寡糖的纯度、生物活性以及安全性。因此,需要监控并控制这些条件,以减少褐变的发生。
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